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        GalaxyBio Cat:  产品名称检索:
        产品信息
         基因组提取
         质粒纯化
         凝胶回收
         PCR产物回收
         RNA提取
         PCR相关制品
         RT-PCR 相关
         荧光PCR相关
         DNA Markers
         克隆与表达载体
         感受态与菌株
         蛋白相关
         免疫诊断
         Vectors、Primers
         基因操作试剂盒
         修饰酶

        服务信息
         DNA解析(测序)服务
         DNA/RNA合成服务
         全基因人工合成服务
         基因工程操作服务
         定量PCR相关服务
         DNA芯片制作、解析服务
          新一代高速序列解析服务
         DNA解析(测序)服务
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              质粒DNA大量提取试剂盒

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        FP00010680元
        FP090502800元

        质粒DNA大量提取试剂盒

        产品简介     
        ※  本试剂盒采用经典的SDS碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅胶膜和树脂在高盐、低pH值状态下选择性的结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后用低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅胶膜和树脂上洗脱。
        ※  采用进口硅胶膜,吸附量大,产率高,实验结果重复性好。
        ※  溶液中添加了作用指示剂,使每一步作用程度一目了然。
          ※  不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
          ※  快速、方便,从250~500 ml大肠杆菌LB(Luria Bertani)培养液中,可快速提取500~1000ug纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达85~90%。
          ※  获得的质粒产量高,超螺旋比例高、纯度好。直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
        操作步骤:
        1.试验前准备及注意事项
         a. 溶液S1 Resuspension Buffer 使用前将RNase A(使用前稍离心)全部加入,均匀混合后4℃保存并标示。
             b. Wash Buffer W1和Wash BufferW2 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
             c. 使用前检查溶液S2、溶液S3各试剂是否有沉淀,若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。S2可以在不烫手时使用,S3室温使用。
             d. 溶液S2 Lysis Buffer及溶液S3用后盖紧瓶盖。
        2.  收菌  取150~250ml 在LB 培养基中培养过夜的高拷贝数质粒菌液,或500 ml 过夜培养的低拷贝质粒/Cosmid菌液(若使用丰富培养基,菌液体积应减半或更少),≥3,000×g 离心10 min,弃上清。将离心管倒置于纸巾上数分钟,除尽上清。
        3.  重悬菌液  加8ml Buffer S1 悬浮细菌沉淀,悬浮需均匀,不应留有小的
         
        菌块。
        * 确认Buffer S1 中已加入RNase A请充分重悬细菌,若不充分会导致碱裂解不完全。
        4.  碱裂解  加8ml Buffer S2,温和并充分地上下翻转8-10 次混合均匀使菌体充分裂解,直至形成透亮的溶液。
        * Buffer S2 使用后立即盖紧瓶盖,以免空气中的CO2 中和Buffer S2 中的NaOH,降低溶菌效率。
        * 避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA 的污染。
        * 此步骤不宜超过5 min
        * Buffer S2 后裂解液会变成蓝色,充分混匀以保证形成均一的蓝色溶液。
        5.  中和  加12ml的Buffer S3,温和并充分地上下翻转10-12 次混合均匀,直至形成紧实的凝集块,室温放置5 min。
        * 加入Buffer S3 后应立即混合,以避免形成局部的凝结块。
        * 避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA 的污染。
        * Buffer S3 后蓝色会消失,充分混匀以保证悬浮物中蓝色均消失。
        6. 过滤 将上清全部转入过滤柱,3000×g 离心min,如过滤不完全,可以适当延长离心时间。
        7. 柱结合  将上述操作的过滤溶液,全部转入至吸附柱中,10,000×g 离心2 min,如过滤不完全,可以适当延长离心时间弃滤液。
        8. 漂洗  将13ml的漂洗缓冲液 加入吸附柱中,10,000×g 离心(4°C)2 min,弃滤液。
        9. 再漂洗  将13ml的漂洗缓冲液 加入吸附柱中,10,000×g 离心(4°C)2 min,弃滤液。 空柱10,000×g 离心(4°C)2 min,除去残留乙醇。
        10. 洗脱  将吸附柱置于洁净的50 ml 离心管中,在吸附柱的膜中央上加1.5 ~3.5ml Elution Buffer,室温 静置5 min。≥6,000×g 离心5 min 收集质粒DNA。
            注意:Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应,。把水或洗脱液加热于65℃使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至65℃,并适当延长洗脱时间
         
        质粒DNA浓度和纯度检测
           OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
           OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
         

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