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      质粒DNA中量提取试剂盒

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FP00110680元
FP091502800元

质粒DNA中量提取试剂盒

质粒DNA中量提取试剂盒
                   (离心柱型)
 
试剂盒内容
10次 货号cat:FP000
50次货号cat:FP090
RNaseA (10mg/ml)   
300ul×5
300ul×25
溶液S1    Resuspension Buffer
125 ml
125 ml×5
溶液S2    Lysis Buffer 
125ml
125 ml×5
溶液S3    Neutralization Buffer
45ml
45 ml×5
树脂溶液  (Matrix)
125 ml
125×5
漂洗缓冲液W1 Wash Buffer W1
75 ml
75 ml×5
漂洗缓冲液W2 Wash Buffer W2
30 ml
30 ml×5
洗脱缓冲液 Elution Buffer
15 ml
145ml×5
过滤柱    Filter Column
10
50
吸附柱     Spin Column
10
50
收集管   Collection Tube(50ml)  
20
100
说明书     Specification
1
1
 
贮存条件:
室温,有效期一年。溶液S1加入RNase后2-8℃保存
产品简介     
※  本公司与由美国公司通力合作,由美方公司提供全方面技术、关键纯化材料,,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位。
※  本试剂盒采用经典的SDS碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅胶膜和树脂在高盐低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅胶膜和树脂上洗脱。
※  采用进口硅胶膜和树脂,吸附量大,产率高,实验结果可重复性好。
※  溶液中添加了作用指示剂,使每一步作用程度一目了然。
  ※  不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
※  溶液S1,加入了特定酶稳定剂,加入RNase A后, 4℃保存至少一年不会失活
  ※  快速、方便,从250~500 ml大肠杆菌LB(Luria Bertani)培养液中,可快速提取500~1000ug纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达85~90%。
  ※  获得的质粒产量高,超螺旋比例高、纯度好。直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
 a. 溶液S1 Resuspension Buffer 使用前将RNase A全部加入(使用前离心),均匀混合后4℃保存并标示。
     b. Wash Buffer W1和Wash BufferW2 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
     c. 使用前检查溶液S2、溶液S3各试剂是否有沉淀,若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。S2可以在手握不烫手时使用,S3室温使用。
     d. 溶液S2 Lysis Buffer及溶液S3用后盖紧瓶盖。
2.  收菌  取150~250ml 在LB 培养基中培养过夜的高拷贝数质粒菌液,或500 ml 过夜培养的低拷贝质粒/Cosmid菌液(若使用丰富培养基,菌液体积应减半或更少),≥3,000×g 离心10 min,弃上清。将离心管倒置于纸巾上数分钟,除尽上清。
3.  重悬菌液  加10 ml Buffer S1 悬浮细菌沉淀,悬浮需均匀,不应留有小的菌块。
* 确认Buffer S1 中已加入RNase A请充分重悬细菌,若不充分会导致碱裂解不完全。
4.  碱裂解  加10 ml Buffer S2,温和并充分地上下翻转8-10 次混合均匀使菌体充分裂解,直至形成透亮的溶液。
* Buffer S2 使用后立即盖紧瓶盖,以免空气中的CO2 中和Buffer S2 中的NaOH,降低溶菌效率。
* 避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA 的污染。
* 此步骤不宜超过5 min
* Buffer S2 后裂解液会变成蓝色,充分混匀以保证形成均一的蓝色溶液。
5.  中和  加4ml的Buffer S3,温和并充分地上下翻转10-12 次混合均匀,直至形成紧实的凝集块,室温放置5 min。
* 加入Buffer S3 后应立即混合,以避免形成局部的凝结块。
* 避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA 的污染。
* Buffer S3 后蓝色会消失,充分混匀以保证悬浮物中蓝色均消失。
6. 过滤 10,000×g 离心10 min。将上清全部转入过滤柱,10,000×g 离心(4°C)2 min,如过滤不完全,可以适当延长离心时间。
7. 加入树脂 用力振荡树脂胶液,使得树脂完全悬浮均匀。加入约12 ml树脂溶液,混匀。
8. 柱结合  将上述操作的混合树脂溶液,分批全部转入转移至吸附柱中,10,000×g 离心2 min,如过滤不完全,可以适当延长离心弃滤液。
9. 漂洗  将13ml的Wash Buffer W1 加入吸附柱中,10,000×g 离心(4°C)2 min,弃滤液。
10. 再漂洗  将13ml的Wash Buffer W1 加入吸附柱中,10,000×g 离心(4°C)2 min,弃滤液。 空柱10,000×g 离心(4°C)2 min,除去残留乙醇。
11. 洗脱  将大量制备管置于洁净的50 ml 离心管中,在制备管的膜中央上加1.5 ml Elution Buffer 或pH8.5去离子水,室温 静置5 min。≥6,000×g 离心5 min 收集质粒DNA。
    注意:Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应,。把水或洗脱液加热于65℃使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至65℃,并适当延长洗脱时间。
质粒DNA浓度和纯度检测
   OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
 
 
 
 
 

 

 

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